Área de Citometría

Este laboratorio presta apoyo técnico a usuarios interesados en las áreas que le son propias.

• Estudio de viabilidad técnica y entrenamiento en la utilización de citómetros de flujo y programas para análisis de datos.
• Análisis de ciclo celular en muestras frescas, criopreservadas o incluidas en parafina por citometría de flujo.
• Estudio biparamétrico de ciclo celular y antígenos de proliferación por citometría de flujo.
• Estudio multiparamétrico de poblaciones celulares por citometría de flujo. Inmunofenotipado.
• Estudio de apoptosis por Anexina V
• Separación celular (Sorting) que permite el aislamiento físico de subpoblaciones celulares de interés. Esta separación  puede llevarse a cabo en tubo de ensayo o en placa de 6, 24, 96 o 384 pocillos. Sorting de célula única.
• Contaje celular absoluto

 Área de Secuenciación

Los equipos principales de análisis de los que está dotado el Laboratorio de Secuenciación son:

• Equipo de electroforesis capilar Genetic Analyzer 3130XL.
• Equipo de PCR a tiempo real HT 7900 con bloques de 96, 384 y TLDA y robot de carga automatizada.
• Equipo para la construcción automatizada de librerías para ensayos de secuenciación masiva Applied Biosystemas Library Builder.
• Equipo de secuenciación masiva Ion Torrent PGM.
• Equipo de cuantificación de ADN y ARN Agilent 2100 Bioanalyzer.

Además se cuenta con el equipamiento complementario habitual en un laboratorio central de Biología Molecular (PCRs, centrífugas, cabinas de flujo laminar, sistemas de electroforesis horizontales,…) y de un servicio de soporte técnico para facilitar a los usuarios no expertos el empleo de las distintas técnicas de análisis posibles.

Equipo de electroforesis capilar Genetic Analyzer 3130XL

Permite la obtención de la secuencia de nucleótidos de una muestra de ADN, el cual puede estar clonado en un vector o haber sido directamente amplificado por PCR, con lecturas de unas 700 bases .

También permite realizar ensayos de genotipado, permitiendo visualizar uno o múltiples fragmentos de ADN amplificados simultáneamente, obteniéndose de este modo patrones de bandas que pueden ser específicos para cada especie o que presenten variabilidad entre los individuos de una determinada especie. Entre las metodologías que permiten este genotipado podemos destacar el empleo de loci microsatélites, AFLP’s, SNP’s y SSCP’s.

Equipo de PCR a tiempo real HT 7900

Detecta los incrementos de fluorescencia producidos en cada ciclo de amplificación de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) permitiendo de esta forma realizar ensayos de cuantificación absoluta de moléculas de ADN/ARN presentes en la muestra, ensayos de expresión relativa de distintos genes dentro de una muestra así como genotipado mediante detección de la variable nucleotídica presente en un punto determinado de una molécula de ADN/ARN (SNP).

Equipo de secuenciación masiva Ion Torrent PGM

Utilizado de forma conjunta con el equipo de construcción de librerías (Library Builder) y el equipo de cuantificación de ADN/ARN (Bioanalyzer), la secuenciación en paralelo masiva  permite  generar cientos de megabases de información de secuencias al día, abriendo la puerta a nuevos estudios de investigación que antes eran difíciles de realizar de una forma práctica. Basada en chips semiconductores, la tecnología de secuenciación Ion Torrent™ es más simple, rápida, rentable y ampliable que otras tecnologías de secuenciación de última generación de sobremesa. Entre las distintas aplicaciones destacan: secuenciación dirigida, secuenciación de exomas, de transcriptomas, análisis de CNV y aneuploídia, secuenciación de ARN pequeño y miARN, tipificación viral, tipificación bacteriana, secuenciación de novo, genotipado por secuenciación, identificación de especies presentes en muestras complejas (alimentos, aguas, suelos, …)

*Para algunos de estos ensayos se utiliza el equipo Ion GeneStudio S5XL en virtud del convenio existente con el Servicio de secuenciación y genómica funcional de la Universidad de Zaragoza.

Área de Biotecnología y cultivos celulares

Esta área ofrece los siguientes servicios:

• Generación de antisueros policlonales de conejo y purificación de la fracción lgG.
• Generación de hibridomas y anticuerpos monoclonales de ratón.
• Cultivos de líneas celulares así como posibilidad de uso de la sala de cultivos para usuarios autorizados.
• Realización y asesoramiento en el diseño y análisis de ensayos de citotoxicidad y proliferación celular.
• Biobanco de líneas celulares.
• Identificación genética de líneas celulares humanas
• Análisis de contaminaciones de cultivos celulares con «Mycoplasma»
• Cultivo y ensayos con bacterias
• Purificación de proteínas con el cromatógrafo ÄKTA FPLC.
• Criopreservación de muestras biológicas.
• Análisis de calidad y cuantificación de ADN, ARN y proteínas con el equipo Agilent Bioanalyzer 2100
• Asesoramiento y apoyo en técnicas de biología molecular (extracción de biomoléculas, electroforesis e inmunoensayos)-

Correo electrónico: inmunotecnologia@uniovi.es

Web del servicio: http://www.sct.uniovi.es/unidades/analisis-biologico/ensayos-biotecnologicos